Multiplication du phalaenopsis... Par fécondation

Trop forte !
Manque plus que le photos,je ne vois d'ailleurs pas pourquoi tu n'en fais pas, pourtant pas très compliqué de déclencher en même temps que tu manipules mais bon…
Sérieusement, c'est toujours impressionnant de te lire, merci pour tout ton travail

Mille bravos.
Tu devrais ouvrir un tutoriel qui pourrait etre en recapitulation [voir modo].

Je suis d'accord avec toi et je mettrai des photos dès que j'aurais fait la manip' mais pour l'instant j'en suis encore à la phase 'commander le matériel'! j'attend une livraison de verrerie acheté via e-bay
Et encore merci pour les compliments!


pourquoi pas mais tu peux me dire ce qu'est un tutoriel?! désolée ma question est certainement stupide mais bon... pas grave

et voici la suite!

2/DESINFECTION DES VEGETAUX
Matériel utilisé :
blouse,
masque,
bec bunsen ou lampe à alcool,
boîte de pétri,
scalpel,
éprouvette,
récipients contenant le milieu de culture,
alcool à 70°,
eau de javel,
hypochlorite de calcium,
pissette d'eau distillée,
spatule,
liquide vaisselle

Formation de la zone stérile par la flamme: cette zone est une sphère stérile dont le centre est la flamme et qui a un rayon d'environ 10cm. C'est dans cette zone qu'il faudra manipuler.
On peut aussi manipuler entre deux flammes: plus facile de travailler sans avoir peur de se bruler!

Semences d'Orchidées
-diluer l'hypochlorite de calcium à 5%
-prendre une petite éprouvette et y verser le désinfectant préalablement préparé. Y placer les graines
-maintenir fermé à l'aide de l'index préalablement désinfecté à l'alcool à 70°. Agiter pendant deux minutes sans s'arrêter ni déplacer l'index. Laisser décanter pendant une minute.
-Retourner le tube et laisser ainsi une minute. Déboucher. Le liquide coule mais les graines restent collées à la paroi du tube.
-prélever les graines et les semer du fond vers l'avant du flacon à l'aide d'une spatule.
-avant de déposer les graines et avant de reboucher le flacon, l'encolure du flacon sera passée à la flamme ainsi que le bouchon.

Désinfection de la plante (pour les saints paulia)
-préléver une feuille mature (située à la périphérie de la plante)
-placer la feuille dans un mouillant composé d'une goutte de liquide vaisselle et de l'eau.
-désinfecter par passage de 12 minutes dans l'eau de javel. Après cette étape, il faut travailler dans le milieu stérile.
-rincer la feuille dans 4 bains, de 5 minutes chacun, d'eau distillée
-couper la feuille en carrés de 1cm de côté, à l'aide du scalpel, dans la boîte de pétri.
-de même que pour les semences, flamber l'encolure et le bouchon du flacon.

note :
-attention l'hypochlorite de calcium est corrosif
-lors de la manipulation il ne faut ni parler ni faire de courants d'air.

Récolte de graines :
Pour récolter les graines d'orchidée, il est necessaire d'utiliser du papier timbre: les graines ressemblent à de la poussière car elles sont extrêmement petites, on met donc le papier timbre sur la cosse et on attend qu'elle se fendille et déverse les graines.

La suite pour plus tard!

C'est très fort ce que tu es en train de faire. Et cela mériterait largement un post-it une fois l'aventure terminée. Je te propose mes services si tu veux que je te fasse une mise en page pour en faire un PDF ou autre.
Un tutoriel, c'est comme un mode d'emploi. Ce que tu fais là est clair, lisible, on n'est jamais perdu : Tu feras un sujet distinct sans commentaires quand tu auras fini. Le top bien sur, ce sont des photos des manip, il te faudrait quelqu'un avec toi. Peut-être que par commodité vous pourriez faire les photos "à blanc", c'est à dire sans vraiment respecter l'atmosphère stérile (suis-je clair ? ).
Continue, c'est du grand art

merci pour tout! ta proposition est très gentille! Je te confierai la mise en page de tout ça finit, comme tu me le proposes. (en plus moi et les mises en page ) Au moins je suis sûre que si tu le fais tout sera clean!
Je ferais des photos de tout ça, pour montrer les étapes etc... et plutôt des photos à blanc effectivement car les conditions de stérélité ne seraient peut-être pas optimale sinon...

Et une fois la grande difficulté franchie, je continuerai à mettre des photos pour montrer l'évolution des petits

Pourtant ce que tu fais ici c'est top clean/carré/lisible !
J'attends tes photos…

Et voici la fin du travail!

Une fois la manipulation effectuée, les flacons doivent être exposés à une lumière vive mais il faut faire attention à ce qu'ils ne chauffent pas et à les placer dans un endroit sec.
Il faut éviter les écarts de température. La germination sera rapide si la température n'est pas trop fraîche.


Après la manipulation
REPIQUAGE ET ACCLIMATATION DES PLANTULES
Matériel utilisé
serre,
brumisateur,
tout le matériel utilisé précédemment car il faudra répéter les opération pour effectuer le repiquage.

1/REPIQUAGE
Lorsque les plantules se seront développés, il faudra les repiquer car le milieu nutritif s'épuise. Pour cela, il faudra répéter la 1ère étape mais au lieu d'incliner les récipients, il faut les laisser horizontaux: le repiquage ne s'effectue pas sur gélose inclinée contrairement au 1er passage sur milieu d'enracinement.
L'extraction des plantules sera effectué au moyen d'une pince en milieu stérile
Généralement on repique les plantules après quelques mois en respectant les mêmes précautions de stérilité qu'auparavant.
Hormis pour la forme de la gélose, toutes les étapes seront répétées à l'identique.

2/ACCLIMATATION
Quand les plantules sont assez développés (environ 6 mois à 1 an après) il faudra les acclimater.
Il faut toujours acclimater le contenu d'un bocal complet car une fois ouvert il n'est plus stérile.
Tremper les racines des plan dans de l'eau légèrement tiède pour éliminer la gélose restante.
Repiquer les plans dans des bacs propres.
Pour compacter le terreau, brumiser une fois toutes les plantules repiquées.
Placer en serre.
Fournir aux plantes la même température et le même éclairement que lorsqu'ils étaient en train de former des racines.
Entrouvrire progressivement la serre lorsque les plants paraissent assez vigoureux, jusqu'à ce qu'ils soit possible de les sortir de la serre.

Note
-Lorsque des auréoles violacées apparaîssent autour des plants il faut procéder à un repiquage rapidemment
-Pour les jeunes orchidées: les replanter dans le même substrat que les adultes mais à granulométrie beaucoup plus fine.
-Lorsque les plants sont suffisemment âgés (environ 2 ans plus tard) les repiquer en pots individuels

il me faut encore une lampe à alcool/un bec bunsen (mais plutôt une lampe à alcool car les bec bunsen coûtent décidement très cher!) les milieux de culture, la pissette d'eau distillée et la pince à long manche ainsi que l'hypochlorite de calcium et le coton cardé. Après je pourrai faire les photos!

tu devrait trouver le reste du materiel la :
http://www.clivia.fr/catcom2.htm

merci pour le lien phasme, je n'avait pas remarqué ce site et il présente le gros avantage d'afficher les prix directement! merci beaucoup

Je me suis rendue compte que je n'avait pas cité les sites à visiter pour enrichir sa connaissance des manip in vitro:
tout d'abord, à visiter absolument: http://pagesperso-orange.fr/lalam/cultu ... flacon.htm où la sortie des plantules de flacons est expliqué très clairement
ensuite un site sur les manip in-vitro en général très clair http://encyclo.free.fr/pages/in_vitro.htm même si c'est le cas des carnivores qui est traité il est à voir
là aussi site à voir, il traite particulièrement des orchidées http://www.univ-lille1.fr/orchid/fricho ... /index.htm
très bon site aussi où la question de la stérilité est très bien traitée http://www.aaoe.fr/post/2006/11/17/La-culture-in-vitro c'est là que j'ai trouvé les informations concernant la formation du bouchon adapté. C'est l'un des rares sites qui en parle! la question de la désinfection des graines y est aussi clairement exposée. J'ai pu constater que dans les différents sites qui existent, même si le protocole est souvent le même, les temps de désinfection varient. Cependant c'est dans ce site que la désinfection est la mieux expliquée et c'est de ce site que j'ai repris des infos

bonne lecture!

alors du nouveau ? tu en ai ou dans les achat de materiel ?

oui il y a du nouveau!

pour les achats de matériel, j'ai presque réuni tout ce qu'il me faut, je crois qu'il ne manque plus que la pissette pour mettre l'eau distillée et du coton non cardé. je sais où l'acheter mais le problème se pose pour le coton car l'usine qui le fabrique est en rupture de stock et comme ils n'ont pas assez de demande je ne sais pas si j'en aurais...
j'ai acheté les milieux de culture, l'hypochlorite de calcium, des boîtes de pétri et une lampe à alcool au lien que tu m'as indiqué Phasme, au laboratoire Clivia. Après j'ai acheté de l'eau distillée stérile à la pharmacie.
Voilà où j'en suis pour le matériel. Si vous voulez je peux mettre des photos des différents éléments dès ce week end (normalement) avec le prix et le lieu d'achat.

Après, pour les photos mise en scène de la manip ce sera pour les vacances de février, dans 3 semaines, en espérant que j'aurais bientôt le coton non cardé!

cool tout sa sa avance bien

juste une question c'est quoi du coton non cardé ?

sinon moi en cour j'ai vu la multiplication des rosier en CIV

tu a acheter su milieu de culture déjà prêt (tout les éléments dont déjà mélanger et pesé ) ou tu doit faire la préparation toi même ?

le coton non cardé est du coton 'brut' je crois, il n'a pas été peigné

Les milieux de culture sont déjà tout prêts et j'ai demandé à me faire fabriquer du milieu de knudson.

voilà sinon moi je vais voir les hormones de croissance utilisées avec les milieux de culture en cours, au troisième trimestre, (précision je suis en 1ère S) mais je cois que l'on ne fera pas d'expériences avec des plantes cultivées in vitro. Dommage j'aurais tout su faire!