Au jardin, forum de jardinage

bonjour

je ne suis pas phytophysiologiste (je suis spécialisée en génétique, et plutôt animale) mais j'aimerais me lancer dans la culture in vitro en amateur.
j'aimerais donc avoir qq conseils généraux:
point de départ: graines et boutures
espèces: à déterminer (je pensais à des cactées, palmier, bananier, caféier..)
pour tout ce qui concerne les règles d'aseptie, c ok
c plutôt sur le protocole à observer et adaptations aux différentes espèces envisagées (milieu de culture, dosages et moments d'intervention des hormones..): comment préparer le milieu gélosé?: j'ai de l'agarose à disposition (+les différents sels minéraux), mais je n'ai pas trouvé de précisions sur la concentration à employer: tt le monde parle de gélose, point barre...
je lance ça tel quel, j'étofferai de précisions s'il le faut
merci d'avance!

Et bien en général je crois que c'est 0,7% pour des milieux solides, tu trouveras beaucoup de détails sur la composition des différents milieux sur le net.

En attendant, le lien vers le sujet dont nous avions discuté récemment, et qui contient d'autres liens

ftopic13380.html

Pour les cactées tu te compliques la vie à mon avis.

merci ugli

effecivement je me complique la vie,...et j'aime ça:
pourquoi faire simple qd on peut faire compliqué, c mon credo
en fait g toujours fait poussé des plantes diverses et variées ..disons de façon traditionnelle

maintenant ça c plus pour le fun
pi j'suis un ti rat de labo tu sais...et très curieuse
j'veux tt voir de mes ti bébés !

quoique 0.7% ça me parait bien élevé
j'utilise en général du 1%, et quqlque fois du 0.8% pour mes gels de migration et c bien mastoc!

En effet 1% c'est mastoc mais pour inciser la gélose et y planter les boutures il faut bien ça pour qu'elles tiennent ...

Haize je te conseille de trouver un millieu tout prêt à ajouter à la gelose car j'ai un mauvais souvenir de mes TP de culture végétale à peser des tas de macro éléments et vitamines sans compter les hormones de croissance et les antibiotiques pour de simples boutures et de la morphogénèse de Saint-Paulia ...

Exerces-toi d'abord avec des plantes à tiges molles de type St-Paulia, tournesol ou tabac qui comptent parmis les plus simple et les plus faciles à désinfecter .

Pour ma part, je m'y lance à la Saint Valentin, affaire à suivre!

Merci pour vos conseils

montaigne a bien raison, et crois bien que j'ai parfaite conscience de la difficulté de mon projet, fdw67. J'ai juste envie de transposer sur du végétal ce que j'ai coutume de faire depuis des années sur des cellules animales. Comme l'echec sera certainement l'issue de cette première tentative, je m'attends à renouveller l'opération un certain nombre de fois avant d'obtenir un résultat
Quant à la préparation des milieux et le dosage de x composés, c également mon lot quasi quotidien au labo. mais je compte c vrai m'en procurer du tout près dans le commerce ( je n'ai que clivia pour le moment, si vous en connaissez d'autres...les prix sont un peu abusiffs je trouve ), et en faire également pour tester, afin de m'affranchir à terme de la contrainte des commandes. quoiqu'il en soit je vous ferai part des résultats au fur et à mesure.
autre question: si je part de graines, je n'ai pas besoin d'hormones normalement, non?

Bon ben tu n'auras aucun problème sous une hotte à flux laminaire

Je testerai Phalaenopsis et consorts selon ce que j'aurai sous la main.

En effet , avec ls graines les hormones sont déja présentes .
Mais je me souviens qu'on avait d'abord laisser imbiber les graines de tournesol dans l'eau qq heures pour que l'albumen gonfle et que tous les mécanismes hormonaux se mettent en route puis on les a décortiquées et piquées en géloses ....

http://www.cactuspro.com/article020.html

http://www.clivia.fr/catcom.htm

salut,

Je travaille sans un labo de recherche et je fais de la culture in vitro
d'abord, pour la génose, il ne faut pas de l'agarose (ça c'est pour les gels d'ADN) mais de l'agar (agar agar, plant agar, phytagel, agargel...) à des concentrations allant de 4 à 8 g/L, ça dépends de l'agar.

si tu pars de graines, pas besoin d'hormone, même chose pour des boutures. les hormones sont surtout utilisées pour forcer les plantes à se différenciers en cals, ou à régénérer des plantes à partir d'explants par exemple. des sels tout prêts (Murashigue et skoog ou autres) il y en a chez Sigma, assez cher, nous on se sert des produits Duchefa distribués par Kalys, bien moins cher (7,5 euros pour 10 litres de milieu) mais je ne sais pas si c'est ouvert aux particuliers.

pour la préparation, mélanger eau + sels + sucre + agar puis autoclaver. couler en boites ou bocaux stérile avant solidification.

Pour du tabac par ex, on travaillait avec du MS et 2 % de saccharose.

pour la désinfection des graines, je conseille un passage rapide dans de l'alcool à 70 puiis du Domestos 20 % pendant 20 min, suivi de 3 rinçages au moins à l'eau stérile.

après, je ne travaille pas sur des plantes d'ornement, mais je sais que le saint paulia marche très bien.

voilà, si je peux vous donner d'autres conseils...

Audrey

merci Audrey

Pour les milieux sigma, malheureusement non, ils ne sont pas accessibles aux particuliers, il faut passer par le labo.
quant à l'agarose, mis à part le prix plus élevé, pourquoi ne peut-il pas faire l'affaire, étant une forme purifiée de l'agar? le rôle de la gélose n'est-il pas juste de gélifier donc effet neutre, ou l'agaropectine entre autre,influe-t-elle sur la culture (présence de groupement sulfates, d'acide d glucuronique et pyruvate)? Si c juste pour le prix, je dispose d'un vieux flacon d'agarose dont on ne se sert pas pour nos gels, et qui devrait convenir.
voilà donc si tu pouvais préciser la chose..

je me renseigne demain, mais ce que je sais, c'est que selon l'agar utilisé, la disponibilité en eau pour la plante n'est pas la même, et la phénotype des racines et de la plantes peuvent être modifiées selon l'agar. Donc, je ne sais pas ce que donnerait de l'agarose.