culture in vitro
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haize
- Graine de timide
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- Localisation : bayonne
culture in vitro
bonjour
je ne suis pas phytophysiologiste (je suis spécialisée en génétique, et plutôt animale) mais j'aimerais me lancer dans la culture in vitro en amateur.
j'aimerais donc avoir qq conseils généraux:
point de départ: graines et boutures
espèces: à déterminer (je pensais à des cactées, palmier, bananier, caféier..)
pour tout ce qui concerne les règles d'aseptie, c ok
c plutôt sur le protocole à observer et adaptations aux différentes espèces envisagées (milieu de culture, dosages et moments d'intervention des hormones..): comment préparer le milieu gélosé?: j'ai de l'agarose à disposition (+les différents sels minéraux), mais je n'ai pas trouvé de précisions sur la concentration à employer: tt le monde parle de gélose, point barre...
je lance ça tel quel, j'étofferai de précisions s'il le faut
merci d'avance!
je ne suis pas phytophysiologiste (je suis spécialisée en génétique, et plutôt animale) mais j'aimerais me lancer dans la culture in vitro en amateur.
j'aimerais donc avoir qq conseils généraux:
point de départ: graines et boutures
espèces: à déterminer (je pensais à des cactées, palmier, bananier, caféier..)
pour tout ce qui concerne les règles d'aseptie, c ok
c plutôt sur le protocole à observer et adaptations aux différentes espèces envisagées (milieu de culture, dosages et moments d'intervention des hormones..): comment préparer le milieu gélosé?: j'ai de l'agarose à disposition (+les différents sels minéraux), mais je n'ai pas trouvé de précisions sur la concentration à employer: tt le monde parle de gélose, point barre...
je lance ça tel quel, j'étofferai de précisions s'il le faut
merci d'avance!
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ugli
- Pépinière à blabla
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Et bien en général je crois que c'est 0,7% pour des milieux solides, tu trouveras beaucoup de détails sur la composition des différents milieux sur le net.
En attendant, le lien vers le sujet dont nous avions discuté récemment, et qui contient d'autres liens
ftopic13380.html
Pour les cactées tu te compliques la vie à mon avis.
En attendant, le lien vers le sujet dont nous avions discuté récemment, et qui contient d'autres liens
ftopic13380.html
Pour les cactées tu te compliques la vie à mon avis.
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haize
- Graine de timide
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- Localisation : bayonne
culture in vitro
merci ugli
effecivement je me complique la vie,...et j'aime ça:
pourquoi faire simple qd on peut faire compliqué, c mon credo
en fait g toujours fait poussé des plantes diverses et variées ..disons de façon traditionnelle
maintenant ça c plus pour le fun
pi j'suis un ti rat de labo tu sais...et très curieuse
j'veux tt voir de mes ti bébés !
effecivement je me complique la vie,...et j'aime ça:
pourquoi faire simple qd on peut faire compliqué, c mon credo
en fait g toujours fait poussé des plantes diverses et variées ..disons de façon traditionnelle
maintenant ça c plus pour le fun
pi j'suis un ti rat de labo tu sais...et très curieuse
j'veux tt voir de mes ti bébés !
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fdw67
- Bourgeon de bavard
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- Inscription : ven. 18 juin 2004 15:42
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En effet 1% c'est mastoc mais pour inciser la gélose et y planter les boutures il faut bien ça pour qu'elles tiennent ...
Haize je te conseille de trouver un millieu tout prêt à ajouter à la gelose car j'ai un mauvais souvenir de mes TP de culture végétale à peser des tas de macro éléments et vitamines sans compter les hormones de croissance et les antibiotiques pour de simples boutures et de la morphogénèse de Saint-Paulia ...
Exerces-toi d'abord avec des plantes à tiges molles de type St-Paulia, tournesol ou tabac qui comptent parmis les plus simple et les plus faciles à désinfecter .
Haize je te conseille de trouver un millieu tout prêt à ajouter à la gelose car j'ai un mauvais souvenir de mes TP de culture végétale à peser des tas de macro éléments et vitamines sans compter les hormones de croissance et les antibiotiques pour de simples boutures et de la morphogénèse de Saint-Paulia ...
Exerces-toi d'abord avec des plantes à tiges molles de type St-Paulia, tournesol ou tabac qui comptent parmis les plus simple et les plus faciles à désinfecter .
Le bonheur est dans le jardin
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haize
- Graine de timide
- Messages : 5
- Inscription : mar. 25 janv. 2005 15:21
- Localisation : bayonne
Merci pour vos conseils
montaigne a bien raison, et crois bien que j'ai parfaite conscience de la difficulté de mon projet, fdw67. J'ai juste envie de transposer sur du végétal ce que j'ai coutume de faire depuis des années sur des cellules animales. Comme l'echec sera certainement l'issue de cette première tentative, je m'attends à renouveller l'opération un certain nombre de fois avant d'obtenir un résultat
Quant à la préparation des milieux et le dosage de x composés, c également mon lot quasi quotidien au labo. mais je compte c vrai m'en procurer du tout près dans le commerce ( je n'ai que clivia pour le moment, si vous en connaissez d'autres...les prix sont un peu abusiffs je trouve ), et en faire également pour tester, afin de m'affranchir à terme de la contrainte des commandes. quoiqu'il en soit je vous ferai part des résultats au fur et à mesure.
autre question: si je part de graines, je n'ai pas besoin d'hormones normalement, non?
montaigne a bien raison, et crois bien que j'ai parfaite conscience de la difficulté de mon projet, fdw67. J'ai juste envie de transposer sur du végétal ce que j'ai coutume de faire depuis des années sur des cellules animales. Comme l'echec sera certainement l'issue de cette première tentative, je m'attends à renouveller l'opération un certain nombre de fois avant d'obtenir un résultat
Quant à la préparation des milieux et le dosage de x composés, c également mon lot quasi quotidien au labo. mais je compte c vrai m'en procurer du tout près dans le commerce ( je n'ai que clivia pour le moment, si vous en connaissez d'autres...les prix sont un peu abusiffs je trouve ), et en faire également pour tester, afin de m'affranchir à terme de la contrainte des commandes. quoiqu'il en soit je vous ferai part des résultats au fur et à mesure.
autre question: si je part de graines, je n'ai pas besoin d'hormones normalement, non?
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fdw67
- Bourgeon de bavard
- Messages : 309
- Inscription : ven. 18 juin 2004 15:42
- Localisation : Alsace (Wasselonne, Bas-rhin)
En effet , avec ls graines les hormones sont déja présentes .
Mais je me souviens qu'on avait d'abord laisser imbiber les graines de tournesol dans l'eau qq heures pour que l'albumen gonfle et que tous les mécanismes hormonaux se mettent en route puis on les a décortiquées et piquées en géloses ....
Mais je me souviens qu'on avait d'abord laisser imbiber les graines de tournesol dans l'eau qq heures pour que l'albumen gonfle et que tous les mécanismes hormonaux se mettent en route puis on les a décortiquées et piquées en géloses ....
Le bonheur est dans le jardin
mes tof'Ã moi
Il nous faut apprendre à vivre ensemble comme des frères, sinon nous allons mourir ensemble comme des idiots
Il nous faut apprendre à vivre ensemble comme des frères, sinon nous allons mourir ensemble comme des idiots
salut,
Je travaille sans un labo de recherche et je fais de la culture in vitro
d'abord, pour la génose, il ne faut pas de l'agarose (ça c'est pour les gels d'ADN) mais de l'agar (agar agar, plant agar, phytagel, agargel...) à des concentrations allant de 4 à 8 g/L, ça dépends de l'agar.
si tu pars de graines, pas besoin d'hormone, même chose pour des boutures. les hormones sont surtout utilisées pour forcer les plantes à se différenciers en cals, ou à régénérer des plantes à partir d'explants par exemple. des sels tout prêts (Murashigue et skoog ou autres) il y en a chez Sigma, assez cher, nous on se sert des produits Duchefa distribués par Kalys, bien moins cher (7,5 euros pour 10 litres de milieu) mais je ne sais pas si c'est ouvert aux particuliers.
pour la préparation, mélanger eau + sels + sucre + agar puis autoclaver. couler en boites ou bocaux stérile avant solidification.
Pour du tabac par ex, on travaillait avec du MS et 2 % de saccharose.
pour la désinfection des graines, je conseille un passage rapide dans de l'alcool à 70 puiis du Domestos 20 % pendant 20 min, suivi de 3 rinçages au moins à l'eau stérile.
après, je ne travaille pas sur des plantes d'ornement, mais je sais que le saint paulia marche très bien.
voilà , si je peux vous donner d'autres conseils...
Audrey
Je travaille sans un labo de recherche et je fais de la culture in vitro
d'abord, pour la génose, il ne faut pas de l'agarose (ça c'est pour les gels d'ADN) mais de l'agar (agar agar, plant agar, phytagel, agargel...) à des concentrations allant de 4 à 8 g/L, ça dépends de l'agar.
si tu pars de graines, pas besoin d'hormone, même chose pour des boutures. les hormones sont surtout utilisées pour forcer les plantes à se différenciers en cals, ou à régénérer des plantes à partir d'explants par exemple. des sels tout prêts (Murashigue et skoog ou autres) il y en a chez Sigma, assez cher, nous on se sert des produits Duchefa distribués par Kalys, bien moins cher (7,5 euros pour 10 litres de milieu) mais je ne sais pas si c'est ouvert aux particuliers.
pour la préparation, mélanger eau + sels + sucre + agar puis autoclaver. couler en boites ou bocaux stérile avant solidification.
Pour du tabac par ex, on travaillait avec du MS et 2 % de saccharose.
pour la désinfection des graines, je conseille un passage rapide dans de l'alcool à 70 puiis du Domestos 20 % pendant 20 min, suivi de 3 rinçages au moins à l'eau stérile.
après, je ne travaille pas sur des plantes d'ornement, mais je sais que le saint paulia marche très bien.
voilà , si je peux vous donner d'autres conseils...
Audrey
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haize
- Graine de timide
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- Inscription : mar. 25 janv. 2005 15:21
- Localisation : bayonne
merci Audrey
Pour les milieux sigma, malheureusement non, ils ne sont pas accessibles aux particuliers, il faut passer par le labo.
quant à l'agarose, mis à part le prix plus élevé, pourquoi ne peut-il pas faire l'affaire, étant une forme purifiée de l'agar? le rôle de la gélose n'est-il pas juste de gélifier
donc effet neutre, ou l'agaropectine entre autre,influe-t-elle sur la culture (présence de groupement sulfates, d'acide d glucuronique et pyruvate)? Si c juste pour le prix, je dispose d'un vieux flacon d'agarose dont on ne se sert pas pour nos gels, et qui devrait convenir.
voilà donc si tu pouvais préciser la chose..
Pour les milieux sigma, malheureusement non, ils ne sont pas accessibles aux particuliers, il faut passer par le labo.
quant à l'agarose, mis à part le prix plus élevé, pourquoi ne peut-il pas faire l'affaire, étant une forme purifiée de l'agar? le rôle de la gélose n'est-il pas juste de gélifier
donc effet neutre, ou l'agaropectine entre autre,influe-t-elle sur la culture (présence de groupement sulfates, d'acide d glucuronique et pyruvate)? Si c juste pour le prix, je dispose d'un vieux flacon d'agarose dont on ne se sert pas pour nos gels, et qui devrait convenir.voilà donc si tu pouvais préciser la chose..
