Multiplication du phalaenopsis... Par fécondation

[édelweiss31]

merci pour tout! ta proposition est très gentille! Je te confierai la mise en page de tout ça finit, comme tu me le proposes. (en plus moi et les mises en page ) Au moins je suis sûre que si tu le fais tout sera clean!
Je ferais des photos de tout ça, pour montrer les étapes etc... et plutôt des photos à blanc effectivement car les conditions de stérélité ne seraient peut-être pas optimale sinon...

Et une fois la grande difficulté franchie, je continuerai à mettre des photos pour montrer l'évolution des petits

[Mr Happy]

Au moins je suis sûre que si tu le fais tout sera clean!
Je ferais des photos de tout ça, pour montrer les étapes etc... et plutôt des photos à blanc effectivement car les conditions de stérélité ne seraient peut-être pas optimale sinon...

Et une fois la grande difficulté franchie, je continuerai à mettre des photos pour montrer l'évolution des petits

Pourtant ce que tu fais ici c'est top clean/carré/lisible !
J'attends tes photos…

[édelweiss31]

Et voici la fin du travail!

Une fois la manipulation effectuée, les flacons doivent être exposés à une lumière vive mais il faut faire attention à ce qu'ils ne chauffent pas et à les placer dans un endroit sec.
Il faut éviter les écarts de température. La germination sera rapide si la température n'est pas trop fraîche.


Après la manipulation
REPIQUAGE ET ACCLIMATATION DES PLANTULES
Matériel utilisé
serre,
brumisateur,
tout le matériel utilisé précédemment car il faudra répéter les opération pour effectuer le repiquage.

1/REPIQUAGE
Lorsque les plantules se seront développés, il faudra les repiquer car le milieu nutritif s'épuise. Pour cela, il faudra répéter la 1ère étape mais au lieu d'incliner les récipients, il faut les laisser horizontaux: le repiquage ne s'effectue pas sur gélose inclinée contrairement au 1er passage sur milieu d'enracinement.
L'extraction des plantules sera effectué au moyen d'une pince en milieu stérile
Généralement on repique les plantules après quelques mois en respectant les mêmes précautions de stérilité qu'auparavant.
Hormis pour la forme de la gélose, toutes les étapes seront répétées à l'identique.

2/ACCLIMATATION
Quand les plantules sont assez développés (environ 6 mois à 1 an après) il faudra les acclimater.
Il faut toujours acclimater le contenu d'un bocal complet car une fois ouvert il n'est plus stérile.
Tremper les racines des plan dans de l'eau légèrement tiède pour éliminer la gélose restante.
Repiquer les plans dans des bacs propres.
Pour compacter le terreau, brumiser une fois toutes les plantules repiquées.
Placer en serre.
Fournir aux plantes la même température et le même éclairement que lorsqu'ils étaient en train de former des racines.
Entrouvrire progressivement la serre lorsque les plants paraissent assez vigoureux, jusqu'à ce qu'ils soit possible de les sortir de la serre.

Note
-Lorsque des auréoles violacées apparaîssent autour des plants il faut procéder à un repiquage rapidemment
-Pour les jeunes orchidées: les replanter dans le même substrat que les adultes mais à granulométrie beaucoup plus fine.
-Lorsque les plants sont suffisemment âgés (environ 2 ans plus tard) les repiquer en pots individuels

[édelweiss31]

il me faut encore une lampe à alcool/un bec bunsen (mais plutôt une lampe à alcool car les bec bunsen coûtent décidement très cher!) les milieux de culture, la pissette d'eau distillée et la pince à long manche ainsi que l'hypochlorite de calcium et le coton cardé. Après je pourrai faire les photos!

[phasme]

il me faut encore une lampe à alcool/un bec bunsen (mais plutôt une lampe à alcool car les bec bunsen coûtent décidement très cher!) les milieux de culture, la pissette d'eau distillée et la pince à long manche ainsi que l'hypochlorite de calcium et le coton cardé. Après je pourrai faire les photos!

tu devrait trouver le reste du materiel la :
http://www.clivia.fr/catcom2.htm

[édelweiss31]

merci pour le lien phasme, je n'avait pas remarqué ce site et il présente le gros avantage d'afficher les prix directement! merci beaucoup

Je me suis rendue compte que je n'avait pas cité les sites à visiter pour enrichir sa connaissance des manip in vitro:
tout d'abord, à visiter absolument: http://pagesperso-orange.fr/lalam/cultu ... flacon.htm où la sortie des plantules de flacons est expliqué très clairement
ensuite un site sur les manip in-vitro en général très clair http://encyclo.free.fr/pages/in_vitro.htm même si c'est le cas des carnivores qui est traité il est à voir
là aussi site à voir, il traite particulièrement des orchidées http://www.univ-lille1.fr/orchid/fricho ... /index.htm
très bon site aussi où la question de la stérilité est très bien traitée http://www.aaoe.fr/post/2006/11/17/La-culture-in-vitro c'est là que j'ai trouvé les informations concernant la formation du bouchon adapté. C'est l'un des rares sites qui en parle! la question de la désinfection des graines y est aussi clairement exposée. J'ai pu constater que dans les différents sites qui existent, même si le protocole est souvent le même, les temps de désinfection varient. Cependant c'est dans ce site que la désinfection est la mieux expliquée et c'est de ce site que j'ai repris des infos

bonne lecture!

[phasme]

alors du nouveau ? tu en ai ou dans les achat de materiel ?

[édelweiss31]

oui il y a du nouveau!

pour les achats de matériel, j'ai presque réuni tout ce qu'il me faut, je crois qu'il ne manque plus que la pissette pour mettre l'eau distillée et du coton non cardé. je sais où l'acheter mais le problème se pose pour le coton car l'usine qui le fabrique est en rupture de stock et comme ils n'ont pas assez de demande je ne sais pas si j'en aurais...
j'ai acheté les milieux de culture, l'hypochlorite de calcium, des boîtes de pétri et une lampe à alcool au lien que tu m'as indiqué Phasme, au laboratoire Clivia. Après j'ai acheté de l'eau distillée stérile à la pharmacie.
Voilà où j'en suis pour le matériel. Si vous voulez je peux mettre des photos des différents éléments dès ce week end (normalement) avec le prix et le lieu d'achat.

Après, pour les photos mise en scène de la manip ce sera pour les vacances de février, dans 3 semaines, en espérant que j'aurais bientôt le coton non cardé!

[phasme]

cool tout sa sa avance bien

juste une question c'est quoi du coton non cardé ?

sinon moi en cour j'ai vu la multiplication des rosier en CIV

tu a acheter su milieu de culture déjà prêt (tout les éléments dont déjà mélanger et pesé ) ou tu doit faire la préparation toi même ?

[édelweiss31]

le coton non cardé est du coton 'brut' je crois, il n'a pas été peigné

Les milieux de culture sont déjà tout prêts et j'ai demandé à me faire fabriquer du milieu de knudson.

voilà sinon moi je vais voir les hormones de croissance utilisées avec les milieux de culture en cours, au troisième trimestre, (précision je suis en 1ère S) mais je cois que l'on ne fera pas d'expériences avec des plantes cultivées in vitro. Dommage j'aurais tout su faire!

[phasme]

je vois pas a quoi il sert le coton mais c'est pas grave

sinon tu as acheter un saint paulia aussi ? je suis sur que tu la oublier lol

[édelweiss31]

d'après ce que j'ai compris le coton sert à laisser respirer le milieu (puisque le bouchon est troué je le rappelle et c'est là que l'on met le coton) tout en empêchant les bactéries de rentrer. Par contre pourquoi doit il être brut? cela me laisse perplexe. Peut-être que le coton peigné laisse passer les bactéries?

Et non perdu je n'ai pas oublié le saint paulia! j'en ai acheté un en allant faire les soldes à Truff (au rayon orchidée bien sûr...) J'ai donc un saint paulia à décapiter (quand même pas je vais "juste" lui enlever 5 feuilles ou qqch comme ça). Je sens que je vais être envahie de St Paulia avec tous ceux que j'ai déjà...

[phasme]

ahh oui c'est vrai j'avais oublié qu'il y avait un troue dans le couvercle

pour les saint paulia tu risque d'en avoir un certain nombre si j'en croit mes livre de production florale et mon cour

1 feuille = 5 tronçons de pétiole (la il utilse le petiole et non la feuille )
~ 5X12 bourgeon
= 60 plants au bout de 6/8 semaines

a partir d'un feuille de saint paulia au peut obtenir 7 millions de plantes en CIV identique au pied mére

[édelweiss31]

AAAAAAAAAAAAARRRRRRRRRRRGHHHHHHHH!!!!!

bon et bien disons que je ferais fortune en les revendant

[phasme]

lol , sa se vent plus le saint paulia c'est plus a la mode

[édelweiss31]

[phasme]

alors des nouvelles ?

[édelweiss31]

alors, je n'ai toujours pas de coton non cardé et ce tjs pour les mêmes raisons que la dernière fois... mais si la rupture de stock se prolonge trop j'utilisrai des boîtes de pétri. Après sinon il me manque une pissette mais ça j'irai l'acheter bientôt normalement. Dernier petit problème mais qui ne s'achète pas: il me faut du temps !! pour réviser un peu tout ça et bien sûr pour faire la manip elle-même. Et ça c'est vraiment très dur à trouver!

[Mr Happy]

Ça discute sec en MP, et je remercie Sophie.pau de me motiver en me trouvant des liens afin de semer mes graines. Mais bon, c'est plutôt pas facile, je suis plutôt fainéant, pas solitaire pour deux sous donc…
Sophie, je me permets de donner le dernier lien que tu viens de m'envoyer :
http://www.aaoe.fr/post/2006/11/17/La-culture-in-vitro

Pas mal, la bidouille pour avoir de l'air stérile est géniale !!!

Les filles, vos graines partent tout à l'heure, et bonne chance hein ! Je vous envie d'avoir ce courage, dommage que vous soyez si loin, je serai bien venu "superviser" les opérations

[édelweiss31]

Bonjour!
Merci à Mr Happy j'ai reçu les graines hier!(je t'ai envoyé des MP qui restent dans ma boîte d'envoi donc je passe sur le forum...) tu as été généreux dis donc, si avec tout ça il n'y en a aucun qui survit je crois que je vais
J'ai été étonnée par la taille de tes graines, comme Sophie.pau d'ailleurs, je croyait que c'était toutes les orchidées qui avaient des graines microscopiques! là au moins je ne m'arracherai pas les cheveux à les chercher au fin fond de mes tubes à essai... et la stérélisation sera plus facile.
...et oui je mettrai des PHOTOS!! en plus je crois que l'on peut voir des modifs en seulement 12h ça promet !

[Mr Happy]

Suis désolé les filles, j'ai complètement oublié de vous prévenir. La vie file vite en ce moment, et j'oublie beaucoup trop de choses (en tout cas, pas de bisouiller ma marmaille ).
Je vais voir les MP…

En ce qui concerne les graines, j'espère sincèrement que ce sont des graines d'orchidées, que je ne me suis pas fait avoir ! Mais le pépinièriste ne faisait QUE des orchidées et pour les autres, c'était au jardin botanique de Dalat. Donc…

[édelweiss31]

J'ai une bonne nouvelle à annoncer: pour moi la culture in vitro ça a commencé aujourd'hui! comme prévu je me fait la main sur les saints paulia et j'ai constitué les milieux de culture aujourd'hui (enfin ce soir c'est pour ça que je finirai demain.)
On dit que la première expérience n'est pas facile mais je confirme! rien que pour cette première partie j'ai cumulé les catastrophes
Petit récapitulatif des bêtises:
-Tout d'abord dans la phase où l'on est sensé ajouter l'eau distillée au milieu de culture en poudre: il ne faut pas hésiter à chauffer, la constitution du milieu doit se faire au bain marie bouillonnant. Ma 1ère erreur a justement consisté à chauffer à feu tout doux (ben oui j'avais peur que les éléments nutritifs ne soient détruits!), puis a verser au bout d'un certain temps dans les contenants le milieu pas prêt (il me semblait qu'il était limpide... mais non). Mais je ne me rends compte que ce n'est pas bon seulement après avoir tout versé dans mes boîtes de pétri et mes pots de confiture car il se forme deux phases bien distinctes: une aqueuse et l'autre aves tout les éléments non mélangés! Je décide donc de tout remettre dans la casserole et je fais refais chauffer mais cette fois ci à feu très vif. Ensuite je remet le milieu (vraiment limpide cette fois!) dans les récipients utilisées précédemment et où il restait des résidus de poudre... il faut donc espérer que le tout se sera mélangé dans la phase stérilisation à la marmite car je ne vois pas vraiment si c'est OK.
Après cette première erreur j'en commet une autre qui est d'avoir mis les boîtes de pétri dans la cocotte minute: après les 30 minutes de stérilisation il est ressortit... un amas de plastique! Heureusement que j'avais aussi mis des pots de confiture qui ont, eux, résisté!

quelques conseils à retenir:
-ne pas tenter de séparer le milieu de culture en deux parties car il est constitué d'une multitulde de petits éléments qui ne seraient ainsi pas répartis correctement! (j'ai perdu 30min en voulant faire ça et me suis rendu compte de moin erreur une fois que c'était soigneusement divisé! )
-ne pas mettre de récipients en plastique dans la cocotte minute sinon vous vous retrouverez avec un tas de plastique comme moi!
-ne pas hésiter à bien chauffer le milieu pour la mise en flacon mais faire attention tout de même! il faut que le milieu soit limpide comme un verre d'eau, si c'est blanchâtre ou un peu opaque ce n'est pas la peine d'arrêter de chauffer.
-pour l'autoclave, les récipients seront disposés sur le panier de la cocotte car le milieu ne doit pas bouillir, c'est impératif! sinon le milieu aurait des éléments nutritifs détruits.

Voilà c'est une petite mise en bouche la suite pour demain! avec la suite de l'expérience et les photos bien sûr

[claude51]

suis impatiente de voir tout çà et courage édelweiss31

[édelweiss31]

Merci claude51!

Eh bien voilà c'est fait!
Cette deuxième partie a consisté à désinfecter mes végétaux et à les insérer dans mes bocaux stériles préparés préalablement.
Tout d'abord désinfection de la table de travail à l'eau de javel et désinfection aussi à l'eau de javel des boîtes de pétri qui me serviront après pour découper mes feuilles de St paulia. J'installe tout le matériel:
à droite, un bécher contenant scalpel et pince
à gauche,au second plan : les bocaux contenant les milieux
au premier plan : 2 grandes boîtes de pétri: une avec un mouillant composé d'eau distilllée et de liquide vaisselle et l'autre contenant l'eau de javel à laquelle j'ai rajouté un peu d'eau distillée.
au milieu, la lampe à alcool entourée de 4 boîtes de pétri, qui seront par la suite remplies d'eau distillée stérile afin de rincer les feuilles passées dans les désinfectants.

Tout d'abord, en milieu non stérile (je ne travaille pas autour de la flamme) je commence la désinfection de mes feuilles par le trempage dans le mouillant: un passage de 5 minutes
Ensuite je transfère les feuilles dans le désinfectant composé d'eau de javel par passage de 12 minutes. Là je prend le temps de découper mes feuilles en petits morceaux.
Après cette étape il est nécessaire de travailler en condition stériles: je rapproche donc ma boîte de pétri de la flamme et commence le premier bain de rinçage qui dure 5 minutes. Je précise qu'il est nécessaire de bien stériliser les instruments de travail, pour cela tremper dans l'alcool à 70° et passer à la flamme. Tous les bains de rinçage durent 5 minutes. J'ai un problème qui se pose au bout du 2ème bain: Plus assez de mèche pour la lampe à alcool dont la flamme s'éteint! Je vais donc chercher en catastrophe des bougies que je dispose autour des boîtes de pétri. A ce stade je travaille aussi vite que possible car il est évident que les conditions de stérilité ne sont guère respectées. Je conserve deux bougies placées l'une à côté de l'autre et j'ouvre mes bocaux en dirigeant l'ouverture vers la flamme.
Comme vous pouvez le constater sur la photo ce n'est pas particulièrement pratique... et je manque de me brûler plusieurs fois! Vu que la flamme des bougies est plutôt petite je suppose que des bactéries sont venues s'installer dans le pot et certaines feuilles risquent de ne pas se développer (pas toutes j'espère quand même!)

Leçon à retenir:
-Vu les problèmes rencontrés ci-dessus il est certain que de s'entraîner avant de faire la manipulation maîtresse est très fortement conseillé! plusieurs imprévus s'ajoutent (par exemple la flamme qui s'éteint en pleine manip') et tant que la première fois n'est pas passée on ne sait pas trop à quoi s'attendre!
- Utiliser un bec bunsen est à mon avis bcp plus pratique que la lampe à alcool dont la mèche se consomme très vite et qui, en plus, ne produit pas une flamme très puissante

[édelweiss31]

la suite des photos de la manip...