Multiplication du phalaenopsis... Par fécondation

[joyce]

Oui ce serait super interessant. Mets des photos de tout si tu peux.
As tu deja les graines ?

allez, je coche l option surveiller le message comme ca je ne rate rien.

[phasme]

tu doit deja pouvoir mettre des photos du debut de formation de la gousse car 24 A 48 H aprés pollenisation la fleure fane et et on comence a voir la gousse se formé petit a petit

[édelweiss31]

pour l'instant je n'ai pas de graines, j'en aurai dans 9 mois si la fécondation de mes phalaenopsis a marché et que la cosse de graine parvient à maturité-Pour l'instant les fleurs se fanent c'est déja ça.

D'abord je vais tester sur des morceaux de feuille de St Paulia et de carnivore, pour prendre le coup de main mais aussi parce que c'est interessant

[édelweiss31]

voila des photos:




c'est la même que la précédente mais j'ai écarté les pétales pour que l'on puisse voir l'ovaire qui a grossi.Je ne sais pas si ça se voit beaucoup mais ça donne une idée


j'ai remarqué que les tiges ont rougi au niveau de la fleur et que des petites stries sont apparues.Peut-être un début de formation de la cosse!

[phasme]

voila la gousse commense a se former tu la verra grandire de jour en jour


les strie qui sont apparu sont la ou les graine vont sortir une fois mure ais il faudrat recupérer la gousse avant quelle souvre

[joyce]

Pour les recuperer , vers la fin quand la gousse sera tres gonflee, il faudra la mettre dans une pochette a timbres.
Zou ! sur la liste : la pochette a timbres, chez le collectionneur de timbres. C est un papier ni opaque ni transparent. Elle te permettra de recuperer les graines a l interieur sans qu elles ne s echappent.

[édelweiss31]

OK Joyce, je prends note, je le mettrai dans le récapitulatif!

Et une mauvaise nouvelle: une des 2 fleurs fécondées est tombée cet après-midi!
J'espère que l'autre tiendra le coup!

[phasme]

c'est les petales de la fleur qui sont tombé ou toute la fleur ?

[édelweiss31]

Helas c'est bien toute la fleur qui est tombée!
Il en reste encore une j'espère que ça va marcher

[ptamarelle]

Juste une question tu nous montres l'orchidée que tu as fécondé mais avec quelle orchidée l'a tu fécondé?
As-tu fait un croisement entre 2 orchidées différentes ou bien entre 2 fleurs de la même orchidée.
Car si c'est un croisement entre 2 fleurs de la même orchidée ca ne marchera pas, l'orchidée étant la fleur considérée comme la plus évoluée du monde elle a quand même prévu un moyen de se protéger de l'autofécondation qui est considérée par mère nature comme un phénomène anti-évolutionniste puisqu'il limite le remaniement génétique et donc l'évolution.
Je sais pas si j'ai été très clair mais en résumé on ne peut pas autoféconder les orchidées, conrairement à certaines autres plantes.

[édelweiss31]

non je n'ai pas fait d'autofécondation, c'est un croisement entre deux orchidées différentes j'ai mis le pollen d'une des orchidées dans l'ovaire de l'autre et inversement
là une de ces deux fleurs est tombée , peut-être était-elle trop vieille?
je ne me souviens pas exactement quand la plante a fleurit

[joyce]

Quand tu dis toute la fleur cela veut il dire que le pedoncule est tombe lui aussi ? = fichu pour cette fois.
La fleur doit etre ouverte depuis 2 ou 3 jours seulement pour que la fecondation soit un succes.
As tu pris la precaution de feconder plusieurs fleurs sur la meme hampe pour favoriser le flux de seve ? (le monde de l orchidee aux editions Lamartiniere).

[ptamarelle]

non je n'ai pas fait d'autofécondation, c'est un croisement entre deux orchidées différentes j'ai mis le pollen d'une des orchidées dans l'ovaire de l'autre et inversement
là une de ces deux fleurs est tombée , peut-être était-elle trop vieille?
je ne me souviens pas exactement quand la plante a fleurit

Ok.
Je suis d'accord avec ce qu'a dit joyce qu'en au fait de féconder plusieurs fleurs sur la même hampe, parait-il que ca favorise encore plus la réussite de la fécondation.(j'avais du lire ca dans un livre de lecoufle ou autre).

[édelweiss31]

non je n'ai pas fécondé d'autres fleurs sur la même hampe parce que je pensais que ça allait l'épuiser...
Bon ça sera pour l'année prochaine alors!
la fleur fécondée qui reste est toute seule sur sa hampe... d'après ce que vous dites la circulation de la sève ne doit pas se faire très bien.On va voir ce que ça donne!

[édelweiss31]

bonsoir à tous!
comme promis voici la liste du matériel avec des suggestions de lieux d'achat

Matériel
VERRERIE ET MATERIEL POUR LA MANIPULATION:
-un masque
-un bec bunsen ou une lampe à alcool (création de la sphère d'air stérile où il faudra travailler)
-une cocotte minute
-une blouse en coton
-une pissette d'eau distillée
-des pinces (la longueur dépend des récipients utilisé)
-un scalpel
-des bocaux(pour déposer les instruments dans l'alcool mais aussi pour stériliser les fragments de feuille et les graines)
-une éprouvette -en plastique
-erlenmayer ou ballon ou autre (pour faire fondre le milieu de culture)
-tubes à essai, ou boîte de pétri en pyrex, ou flacon (pour la culture des plantules)

utilité: si on utilise des tubes à essai, les plantules sont cultivés séparément et il y a donc moins de risques de contamination que lorsque les plants sont groupés. Néanmoins, si la manipulation est bien faite il n'y a que peu de risque de contamination

note: le matériel utilisé doit être autoclavable!
la taille des récipients utilisés dépend de la taille des plantules cultivés. Il vaut mieux avoir des tailles différentes car il faudra repiquer les plantules au cours de leur croissance
les récipients où sont cultivés les plantules doivent être fermés

OU ACHETER ?
sur le site Labo and Co http://www.laboandco.com/
problème: achat de matériel par lot pour la plupart des articles proposés.Le prix est donc augmenté et en plus, on n'est pas forcément amené à tout utiliser
sur e-bay
problème: trouver le lot intéressant sans matériel inutile assez difficile!
sur le site Technivit laboratoire http://pagesperso-orange.fr/technivit/boutique.htm
intéressant car le matériel proposé est spécialement adapté. Il faut les contacter et ils établissent un devis.


MILIEUX DE CULTURE ET DESINFECTANTS
-Alcool à 70° ou eau de javel (désinfection du plan de travail et des mains)
-hypochlorite de calcium
-eau distillée
-milieux de culture:
milieu de KNUDSON pour les orchidées et milieu De Murashige et Skoog (MS) pour les saint Paulia

OU ACHETER ?
sur le site Technivit laboratoire -voir où acheter ? précédent
l'hypochlorite de calcium se trouve en pharmacie et l'eau distillée en grande surface


MARERIEL UTILISE AUTOUR DE LA MANIPULATION
-une serre (pour acclimater les jeunes plants à la sortie des récipients)
-une pochette à timbres (papier ni opaque ni transparent qui permet de récupérer les graines sans qu'elles ne s'échappent)

OU ACHETER ?
la pochette à timbre se trouve chez un collectionneur de timbres


Voilà un premier aperçu de la liste du matériel.Je serai certainement amenée à modifier certaine choses car je n'ai pas encore fait de manipulation ni acheté le matériel. Je pense que j'achèterai plutôt des tubes à essai pour faire les cultures ... à voir.
pour revenir sur la fécondation de ma fleur: cela a échoué mais je m'y attendais comme il n'y avais qu'une seule fleur sur la tige...
Je vais donc devoir attendre qu'elles refleurissent!
Voila maintenant je travaille au protocole expérimental! -le plus dur...

[Mr Happy]

Bravo Édelweiss. Total respect pour ton travail, continue de nous tenir informé, je lis tout ça avec avidité

[phasme]

joli travaille rien a redire

mais come tu a raté ta fecondation tu aura plus de temps pour t'entrainer sur le saint paulia et tu peut aussi tenté une autre technique c'est avec les yeux de la tige de l'orchidées tu les met dans le milieu de culture et il peuvent te redonner un nouveau plan je te laisse chercher les info dessus mais j'essaye quand même de retrouvé le lien


A++
phasme

[joyce]

Pour faire les manipulations de germination il y a une chose a ne jamais perdre de vue : ambiance sterile. Il faut toujours desinfecter tout et travailler dans une colonne d air chaud, dans un espace clos.
L air ambiant est rempli de poussieres en suspension, de pollens, de spores etc... ceux ci trouvant un milieu nutritif se developpent et creent des moisissures.
Si dans ton entourage, il y a un medecin, pharmacien, biologiste ou une fac de pharmacie, fais toi aider ou conseiller.
Tiens nous au courant.

[édelweiss31]

merci à vous tous pour vos compliments!
Joyce, Je travaille maintenant sur la démarche à suivre pour faire les manip in vitro et notamment sur les conditions stériles:c'est le plus important en fait car c'est de cela que dépend la réussite de la manip...
J'en profite pour poser une question: est -il légal d'utiliser des informations provenant d'autres sites? ou bien y-a-t'il des conditions? je fais un mix de 4 sites car certains éléments ne sont pas clair ou pas assez précis ou ne sont pas forcément adapté dans certains cas...
de toute façon je mettrai les liens vers les sites auxquels je pense mais je voulais savoir si il est possible d'utiliser ce qu'ils disent et de le publier.

[édelweiss31]

bonsoir à tous!
j'ai trouvé la réponse pour mon cas, pas de problème car je ne fais aucun 'copier coller'

j'ai commencé à acheter le matériel: pour l'instant un porte tube à essai et une pince en bois, sur e-bay

et voici une partie du protocole expérimental, fruit de nombreuses heures de travail car c'est vraiment très pointu ces manip in-vitro!
si des points ne vous paraissent pas clairs n'hésitez pas à me le dire et je tenterai d'arranger la chose.

1ère partie
PREPARATION DES MILIEUX DE CULTURE
Matériel utilisé
erlenmeyer ou ballon,
tubes à essai ou flacon (avec bouchon en caoutchouc),
éprouvette graduée,
cocotte-minute,
coton cardé,
blouse,
pissette d'eau distillée,
milieu de culture

-Verser la poudre du milieu utilisé dans un erlenmeyer ou un ballon
-mesurer la quantité d'eau distillée correspondant au volume de la dose au moyen d'une éprouvette graduée et l'ajouter à la poudre
-faire fondre le milieu au bain-marie. Il faut qu'il soit entièrement fondu avant de stériliser, cette étape est donc cruciale. Lorsque le milieu est entièrement fondu, il est limpide.
-répartir le milieu dans les flacons ou tubes à essai et fermer avec le bouchon préalablement préparé (voir ci-dessous)
-placer environ 2 litres d'eau au fond de la cocotte-minute et placer les récipients dans le panier
Stériliser 30min à partir du sifflement de la soupape
-laisser refroidir dans la cocotte-minute sans enlever la soupape
-lorsque le tout est suffisamment refroidit, sortir les flacons et les incliner. Laisser se refroidir et se solidifier pendant environ 3h.
Cette étape donne la forme de la gélose: la gélose doit être inclinée pour les semis et le 1er passage sur milieu d'enracinement.

Préparation des bouchons des flacons/ tubes à essai
-percer le bouchon à l'aide d'un foret de 5mm de diamètre
-boucher le trou avec du coton non cardé
Il ne faut ni trop tasser le coton ni le laisser lâche au risque de contaminer le milieu. Le coton du bouchon ne doit pas être mouillé pour les mêmes raisons



2ème partie
1/ PREPARATION DU PLAN DE TRAVAIL
matériel utilisé :
blouse,
bec bunsen ou lampe à alcool,
boîte de pétri
bocaux,
alcool à 70°,
eau de javel

-se laver soigneusement les mains et les avants-bras au savon puis se ricer les mains à l'alcool à 70°
-nettoyer le plan de travail à l'eau de javel
-placer au centre le bec bunsen ou la lampe à alcool
-placer à droite un bocal contenant de l'alcool à 70° dans lequel seront placés les instruments (les passer à la flamme du bec bunsen juste avant utilisation)
placer devant le bec bunsen une boîte de pétri stérile dans laquelle sera découpée la plante
placer à gauche le flacon/ tubes à essai contenant le milieu de culture
placer derrière les bocaux servant à la désinfection

note:
-il vaut mieux s'entraîner à répéter les mouvements avant pour ne pas se brûler ou faire des mouvements d'air
-placer les instruments à proximité de la flamme pour ne pas faire de grands gestes qui formeraient des courants d'air
-une fois les instruments stérilisés, ils doivent être conservés dans la sphère stérile
-attendre que l'alcool se soit évaporé avant d'approcher les mains de la flamme
-choisir pour manipuler un endroit à l'abri des courants d'air et peu fréquenté car le passage créé des déplacements d'air


la suite pour plus tard -c'est déjà écrit mais il faut que je le tape...

[Mr Happy]

Trop forte !
Manque plus que le photos,je ne vois d'ailleurs pas pourquoi tu n'en fais pas, pourtant pas très compliqué de déclencher en même temps que tu manipules mais bon…
Sérieusement, c'est toujours impressionnant de te lire, merci pour tout ton travail

[joyce]

Mille bravos.
Tu devrais ouvrir un tutoriel qui pourrait etre en recapitulation [voir modo].

[édelweiss31]

Trop forte !
Manque plus que le photos,je ne vois d'ailleurs pas pourquoi tu n'en fais pas, pourtant pas très compliqué de déclencher en même temps que tu manipules mais bon…
Sérieusement, c'est toujours impressionnant de te lire, merci pour tout ton travail

Je suis d'accord avec toi et je mettrai des photos dès que j'aurais fait la manip' mais pour l'instant j'en suis encore à la phase 'commander le matériel'! j'attend une livraison de verrerie acheté via e-bay
Et encore merci pour les compliments!

Tu devrais ouvrir un tutoriel qui pourrait etre en recapitulation [voir modo].

pourquoi pas mais tu peux me dire ce qu'est un tutoriel?! désolée ma question est certainement stupide mais bon... pas grave

[édelweiss31]

et voici la suite!

2/DESINFECTION DES VEGETAUX
Matériel utilisé :
blouse,
masque,
bec bunsen ou lampe à alcool,
boîte de pétri,
scalpel,
éprouvette,
récipients contenant le milieu de culture,
alcool à 70°,
eau de javel,
hypochlorite de calcium,
pissette d'eau distillée,
spatule,
liquide vaisselle

Formation de la zone stérile par la flamme: cette zone est une sphère stérile dont le centre est la flamme et qui a un rayon d'environ 10cm. C'est dans cette zone qu'il faudra manipuler.
On peut aussi manipuler entre deux flammes: plus facile de travailler sans avoir peur de se bruler!

Semences d'Orchidées
-diluer l'hypochlorite de calcium à 5%
-prendre une petite éprouvette et y verser le désinfectant préalablement préparé. Y placer les graines
-maintenir fermé à l'aide de l'index préalablement désinfecté à l'alcool à 70°. Agiter pendant deux minutes sans s'arrêter ni déplacer l'index. Laisser décanter pendant une minute.
-Retourner le tube et laisser ainsi une minute. Déboucher. Le liquide coule mais les graines restent collées à la paroi du tube.
-prélever les graines et les semer du fond vers l'avant du flacon à l'aide d'une spatule.
-avant de déposer les graines et avant de reboucher le flacon, l'encolure du flacon sera passée à la flamme ainsi que le bouchon.

Désinfection de la plante (pour les saints paulia)
-préléver une feuille mature (située à la périphérie de la plante)
-placer la feuille dans un mouillant composé d'une goutte de liquide vaisselle et de l'eau.
-désinfecter par passage de 12 minutes dans l'eau de javel. Après cette étape, il faut travailler dans le milieu stérile.
-rincer la feuille dans 4 bains, de 5 minutes chacun, d'eau distillée
-couper la feuille en carrés de 1cm de côté, à l'aide du scalpel, dans la boîte de pétri.
-de même que pour les semences, flamber l'encolure et le bouchon du flacon.

note :
-attention l'hypochlorite de calcium est corrosif
-lors de la manipulation il ne faut ni parler ni faire de courants d'air.

Récolte de graines :
Pour récolter les graines d'orchidée, il est necessaire d'utiliser du papier timbre: les graines ressemblent à de la poussière car elles sont extrêmement petites, on met donc le papier timbre sur la cosse et on attend qu'elle se fendille et déverse les graines.

La suite pour plus tard!

[Mr Happy]

C'est très fort ce que tu es en train de faire. Et cela mériterait largement un post-it une fois l'aventure terminée. Je te propose mes services si tu veux que je te fasse une mise en page pour en faire un PDF ou autre.
Un tutoriel, c'est comme un mode d'emploi. Ce que tu fais là est clair, lisible, on n'est jamais perdu : Tu feras un sujet distinct sans commentaires quand tu auras fini. Le top bien sur, ce sont des photos des manip, il te faudrait quelqu'un avec toi. Peut-être que par commodité vous pourriez faire les photos "à blanc", c'est à dire sans vraiment respecter l'atmosphère stérile (suis-je clair ? ).
Continue, c'est du grand art